如图12所示，先将灵芝上清液经冻干后，再分散于水溶液中，并以Nanotrac 150 粒径分析仪测定粒径分布（粒径量测上限为6. 54 μ m)，由结果可知，冻干处理会促使灵芝 微粒间再聚集。冻干后，粒径分布范围宽广，有相当比例微粒的粒径大于6. 54μ m(碍于仪 器量测上限而无法测得），其体积平均粒径为1. 9子，由标尺可明显的看到，单一颗粒确可达0. 罩丸 Ιμπι以下的纳米级尺度，但是因颗粒间的再 聚集使整体的粒径范围变大，可达数百纳米，也就是次微米级尺度。
综观上述，灵芝子实体含有大量粗纤维及木质素成分，且一般真菌细胞壁的成分 除了纤维素外尚有几丁质，如灵芝多醣等活性成分也多存在于细胞壁中，本发明透过机械 式研磨来制造灵芝子实体悬浮液的方式，除了无须萃取便可获得完整的活性成分外，还可 大幅提高纤维质比表面积，且纤维质的后续利用无须再粉碎，可作为一种良好的膳食纤维 添加物。 其中，研磨所得的灵芝子实体悬浮液再经后续离心处理后，离心沉降物中富含几丁 质及纤维素，其颗粒尺寸小于10 μ m，质地细致，可作为保养品（如面膜）或敷料、人工皮肤 的基材，而离心上清液中，灵芝微粒粒径都属纳米/次微米级，并保有完整的活性成份，其 几丁质等有效成分为一般热水萃取的5倍以上，且含有部分粒径较小的纤维素，同样可用 以作为保健食品的添加物。 由表7的粒径（灵芝微粒浓度为IOOppm)分析结果可知，未添加乳化剂的灵芝子 实体悬浮液经静置存放96小时后，灵芝微粒再聚集后的体积平均粒径（MV)为3. 24 μ m，其 中，粒径小于1 μ m的微粒（纳米/次微米级）占灵芝子实体总质量的24. 本发明纳米/次微米级灵芝子实体悬浮液，是将灵芝子实体经由机械式研磨后所 得到含有灵芝微粒的灵芝子实体悬浮液，再经离心所得到的离心上清液，该纳米/次微米 级灵芝子实体悬浮液含有灵芝微粒、纤维质、几丁质及3 -葡聚糖，且灵芝微粒的体积平均 粒径小于2iim。 借由离心虽可将离心上清液的粒径分布降至Iym以下，并使其具有的稳定性，但 是相对的，离心上清液的固形物含量及灵芝微粒数会大幅减少。
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观察其于室温下贮 存28天（如图14所示）及1年（如图15所示）的粒径变化，粒径分布虽有往大粒径偏移， 但是偏移幅度甚小，而其体积平均粒径也只分别增至165nm和373nm，显示离心上清液经高 温作用后仍十分稳定，粒子在贮存期间的再聚集现象并不显著。 由于灵芝子实体富含纤维素及几丁质，质地粗糙且坚韧，将这些纤维物质的粒径 下降，除提高比表面积外，也可改善产品进食的口感。 膳食纤维的生理功效与其表面的吸附 作用有关，因此，提高膳食纤维的比表面积，可增进其生理活性。 Imm 下降至1 μ m,比表面积可提高100倍，膳食纤维的建议摄取量可减为原建议量的百分的一， 若粒径下降至IOOnm以下，建议摄取量可减至原建议量的千分的一。 换言的，在500mL的饮 用水中加入50〜500ppm的纳米/次微米级膳食纤维，便可达到膳食纤维的每日建议摄取 量（25g)。基于这个观点，灵芝子实体悬浮液的离心上清液保有灵芝特有的生理活性成分， 还额外提供高表面积的膳食纤维。
在28天亚急毒性试验期间，雄、雌性小鼠对照组及处理组的平均每日体重变化、 平均每日食物消耗量与平均每日水消耗量都无显著差异，雄、雌性小鼠处理组和对照组血 液分析也无明显差异，其检测值都在正常值范围内，主要器官的组织切片检查也正常，所以 在试验期间并未造成死亡现象及引发不良临床s征兆。 整体而言，稀释倍率愈高，微粒间碰撞机率降低，聚集作用减缓，浊度随时间的变 化率趋缓，各稀释倍率的浊度均随时间的增加而下降。 如表1所示研磨条件，在相同研磨时间（90min)下，探讨转速（2310〜3570rpm)、 进料浓度（0. 5〜2. 0g/mL)和研磨珠填充量（80〜140mL)对灵芝纳米/次微米化制程的影响。 机械式研磨是利用机械能量、研磨介质（研磨珠）间的碰撞作用，及浆料-流体与 流体_研磨珠间的剪切力，将大粒子破碎与分散，常用于涂料或纳米粉体制备。
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一种灵芝子实体悬浮液与纳米/次微米级灵芝子实体悬浮液，该灵芝子实体悬浮液为灵芝子实体经由机械式研磨后所得到含有灵芝微粒的液体，并含有纤维质、几丁质及β-葡聚糖，且灵芝微粒的体积平均粒径小于10μm。 透过机械式研磨制成的灵芝子实体悬浮液，除了无须萃取便可获得完整的活性成分外，还可大幅提高纤维质比表面积，且纤维质的后续利用无须再粉碎，可作为一种良好的膳食纤维添加物。 一种纳米/次微米级灵芝子实体悬浮液，其特征在于，是将灵芝子实体经由机械式 研磨后，再经离心所得到的离心上清液，该纳米/次微米级灵芝子实体悬浮液含有灵芝微 粒、纤维质、几丁质及β -葡聚糖，且灵芝微粒的体积平均粒径小于2 μ m。 如图9〜11所示，灵芝子实体经研磨后，高浓度的灵芝微粒及宽广的粒径分布，促 使灵芝微粒间相互碰撞并迅速聚集成较大的微粒团簇，粒径的增加致使重力效应远大于布 朗运动效应，进而产生明显的沉降现象。
可由浊度初步判断灵芝子实体 悬浮液的稳定性，进而淘汰不适用的乳化剂。 使用携带型浊度计（portableturbidimeter， model 21 OOP, HACH company，U. S. Α.)测定储存期间浊度的变化，检测前先以标准品（Gelex Secondary Standards)(浊度分别为 0-10NTU、0_100NTU 和 NTU)校正，取研磨及稳定 处理后的灵芝子实体悬浮液，经适当稀释，取15mL置入水样检测瓶中，直接以浊度计测定 的，单位为NTU。 如表8、9所示，灵芝子实体悬浮液于不同乳化剂添加量（相对于灵芝子实体重 量的5%、10%、20%和50% )时的粒径分析、界面电位量测结果。由粒径分布结果可知， 四种乳化剂中以Span 80的稳定效果，其添加量10 %时，可将微粒的体积平均粒径降至 2. 29 μ m，并提高纳米和次微米粒子所占的比例。观察界面电位的变化情形可发现，提高四 种乳化剂的添加量都可增加灵芝子实体悬浮液的界面电位值，但是高于20%稳定效果有 限。 如表4所示，研磨时间的改变，除了会影响灵芝微粒平均粒径外，也间接影响储存 安定性，研磨时间越长者，产品的稳定性越高。 研磨30分钟的灵芝子实体悬浮液的离心上 清液产品（IOOOOg离心10分钟），经21天的存储器积平均粒径由0. 199 μ m, 但是研磨180分钟的灵芝子实体悬浮液的上清液产品（IOOOOg离心10分钟），体积平均粒 径由0.
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动物是采用自台大医学院动物中心的5-6周ICR小鼠，每剂量组使用雄、雌各12 只动物。 在进行毒性测试前，动物首先在具温度、湿度及光照的动物房适应一周，并自由摄 取正常饲料及水。 一周后开始喂食实验，连续28天后，牺牲小鼠。 急性疼痛多见于睾丸炎和损伤，睾丸炎除血行感染外，更常见的是细菌经尿道逆行至附睾和睾丸，造成附睾炎、睾丸炎，临床可见附睾与睾丸肿胀和疼痛。 睾丸损伤时有外伤史和局部的肿胀及淤血。 剧烈运动或房事、暴力有时可引起提睾肌的强烈收缩，从而使系带过长的睾丸发生扭转并引起睾丸的剧痛。
- 由图3、4所示的粒径分析结果可知，将上述以0.
- 将研磨后及经稳定处理的灵芝子实体悬浮液分别放置在4°C与室温环境下，于储 存期间(0、0.5、1、2、6、12、24、48、72、96小时），取样进行浊度分析和粒径分析。于此试验 中，将添加少许防腐剂，以避免微生物的生长。
- 在中草药中，灵芝子实体被公认为具有多项保健功能，如抗肿瘤、调节免疫机能、 降血脂、降血压、降血糖、抗病毒、抗过敏、抗氧化、抗辐射、抑制血小板凝集与止痛等，无论 是以完整子实体或萃取物食用，灵芝确实是相当安全的中草药，甚至给予高剂量，例如：每 日30g的干燥子实体萃取物，经证实也无显著的毒性反应，且利用动物实验评估灵芝的营 养价值和毒性，结果显示灵芝并无基因毒性（genotoxicity)。
- 机械式研磨 机配有冷却系统，可避免高温的产生，有利于对热敏感的有机材料的处理，例如食品材料与 中草药等。
- 因此，如以浊度作为判断基准，就灵芝子实体悬浮液而言，以5%添加量的聚山梨 醇酐脂肪酸酯作为分散剂，对浓度IOOppm(最高稀释倍率50倍）的灵芝子实体悬浮液有的 稳定性。
经申请人研究，若能将完整的灵芝子实体粒径纳米/次微米化处理，制成纳米/次 微米级灵芝子实体悬浮液，除了有助于灵芝多醣等活性成分的释出，而获得完整的活性成 分，及增加活性成分的吸收与利用外，还可从中获得纳米/次微米化的膳食纤维，而同时减 少废弃物的产生。 一种灵芝子实体悬浮液，其特征在于，是由灵芝子实体经由机械式研磨制成，并含有灵芝微粒、纤维质、几丁质及β‑葡聚糖，且灵芝微粒的体积平均粒径小于10μm。 如表6所示，未添加乳化剂的灵芝子实体经研磨后，灵芝子实体悬浮液浊度高于 1000NTU,稀释2、5、10和50倍后的试样的浊度均随时间而逐渐下降，稀释倍率愈高，浊度的 变化率愈小。 低浓度（高稀释倍率）悬浮液的浊度稳定性较高浓度（低稀释倍率）佳，显示 微粒浓度是影响悬浮液稳定性的重要参数，浓度愈高微粒间碰撞机率愈高，聚集现象也相 对明显。 整体而言，微粒间的聚集相当明显，致使灵芝子实体悬浮液的聚集沉降行为明显。
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必要时可采用精索普鲁卡因封闭治疗，这样可以阻断神经痛的痛源和大脑痛觉中枢之间的恶性循环。 罩丸 有些人稍有不适或根本没有不适也能诱发睾丸的疼痛，这时完全是精神作用在作怪。 有些人则把疼痛与手淫联系起来，整天背着沉重的内疚的思想负担。
虽然灵芝保健食品是目前食品市场的热门商品，然而，其有效成分（例如几丁 质、寡醣、葡聚糖）萃取不易、溶解度低，在人体内的吸收也不甚理想，且萃取后的灵芝 渣（多为膳食纤维的成分）又常被视为废弃物，而造成资源的浪费。 15.如权利要求9、10、12或13所述的纳米/次微米级灵芝子实体悬浮液，其特征在于， 几丁质浓度大于0. 14.如权利要求13所述的纳米/次微米级灵芝子实体悬浮液，其特征在于，灵芝微粒的 浓度范围介于3mg/mL〜20mg/mL。
罩丸: CN101897430A – 灵芝子实体悬浮液与纳米/次微米级灵芝子实体悬浮液
137 μ m，增加率低于10%，显示增加研磨时间有助于粒子的稳定性。 如图2所示，研磨时间也影响粒径，随着研磨时间的增加，体积平均粒径减少，于 研磨60分钟，体积平均粒径的减少速率较高，随后趋缓，研磨90分钟后，灵芝微粒的体积平 均粒径约为1. 3mm锆珠研磨90分钟后，体积平均粒径小于1. 因 所得悬浮液的粒径分布范围较宽，故粒子间易再聚集而沉淀，虽然数目平均粒径比体积平 均粒径小很多，但是为要求较高的质量，本发明是以体积平均粒径为指针。 综合上述浊度分析、粒径分析和界面电位分析结果，于乳化剂添加量5%的情况 下，HLB值小的乳化剂有助于稳定灵芝子实体悬浮液系统，因此，以下便选择蔗糖酯（HLB 3)、脂肪酸甘油脂（HLB 3. 8), Span 85 (HLB 1.8)及Span 80 (HLB 4.3)等，与灵芝子实体实 际进行两段式机械研磨，进行乳化剂添加量对灵芝子实体悬浮液系统稳定性影响的测试。 如图13〜15所示，离心上清液经高压蒸汽灭菌处理后仍保有相当好的安定性， 灭菌处理后，待温度下降至室温便量测其粒径，所有粒子都小于1 μ m，粒径分布范围36〜 800nm，体积平均粒径为140nm，且仍有56%的微粒维持在IOOnm以下。
殊不知过度焦虑、过分把注意力集中在性的表现能力上反而会造成精神性阳痿等性功能障碍。 7.如权利要求6所述的灵芝子实体悬浮液，其特征在于，该可食性乳化剂是选自于由 聚山梨醇酐脂肪酸脂、脂肪酸甘油脂，及聚山梨醇酐脂肪酸脂与脂肪酸甘油脂的混合所组 成的群体。 在本发明中，选择以不同HLB(hydrophile-lipophiIe balance，亲水亲脂均衡） 值的蔗糖酯(sugar ester, HLB分别为3、7、11和15)、聚山梨醇酐脂肪酸酯(Span 85 (司 盘 85) ,Span 80 罩丸 (司盘 85) ,Span 60 (司盘 85) ,Span 20 (司盘 85)和 Tween 65 (吐温 65)、 Tween 20 (吐温 20)，HLB 分别为 1. 7)及脂肪酸甘油脂(HLB 为 3. 8)作为初步筛选的乳化剂，添加量先固定为相对于灵芝子实体重量的5%。
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机械式研磨 机配有冷却系统，可避免高温的产生，有利于对热敏感的有机材料的处理，例如食品材料与 中草药等。 注意休息，不要过度活动，保持好外阴卫生，按时清洗，不要手淫，口服消炎药治疗观察，如果无效，去医院做详细检查，根据检查结果进行有效治疗。 睾丸疼痛的治疗应在确定其病因的基础上进行对症治疗，一时查不出原因，则可做镇静和止痛的对症治疗。
提高进料浓度可降低粒子间的平均距离，并使研磨 珠碰撞范围内存在较多的粒子而增加研磨效率。 填充量过高，可能会限制研磨珠在研磨过 程中的运动，降低碰撞速度，致使研磨效率降低。 罩丸 由上述实验结果可知，在纳米/次微米级 灵芝子实体悬浮液的研磨制程中，使用较高的固形物浓度，并降低研磨转速及研磨珠的填 充量，应可降低产品的体积平均粒径。 界面电位是粒子间吸引力或排斥力的指标，该值的增加，显示粒子越稳定，是测量 粒子表面性质的有效工具。 将稀溶液置于侦测仪上，赋予粒子固定值的电压，观察粒子的移 动速率，由移动速率与时间的相关性，可导出粒子表面的相关性质。
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灵芝子实体悬浮液的灵芝微粒在冷冻过程中会再聚集，解冻后似有离水的相分 离现象，聚集构成的微粒团簇呈棉絮状并难以物理或机械力（如震荡、均质、超音波震荡 罩丸 处理）将的分散，冷冻后子实体悬浮液的粒径分布如图10，体积平均粒径为109μπι。 高 压蒸汽灭菌处理也会造成微粒间严重的再聚集作用，构成呈团块状的微粒团簇，并如同冷 冻处理般难以物理或机械力将的分散，其粒径分布范围5. 5 μ m，体积平均粒径为 132μπι(如图11所示）。机械式研磨所得的灵芝子实体悬浮液，粒径分布范围宽广，易再聚 集沉淀，但是固形物含量高，富含几丁质、纤维素，此灵芝子实体悬浮液或其浓缩产品将适 于作为保健食品的添加物。 如图1所示，转速提高会增加研磨珠间的碰撞次数和强度，致使温度快速上升并 促使粒子再聚集，造成平均粒径的增加。
- 从您描述的症状看可能是睾丸炎症或精索静脉曲张等所致，需要面诊检查才能确定诊断，炎症可以药物治疗，精索静脉曲张需要手术。
- 有些人则把疼痛与手淫联系起来，整天背着沉重的内疚的思想负担。
- Imm 下降至1 μ m,比表面积可提高100倍，膳食纤维的建议摄取量可减为原建议量的百分的一， 若粒径下降至IOOnm以下，建议摄取量可减至原建议量的千分的一。
- 观察其于室温下贮 存28天（如图14所示）及1年（如图15所示）的粒径变化，粒径分布虽有往大粒径偏移， 但是偏移幅度甚小，而其体积平均粒径也只分别增至165nm和373nm，显示离心上清液经高 温作用后仍十分稳定，粒子在贮存期间的再聚集现象并不显著。
- 一种灵芝子实体悬浮液与纳米/次微米级灵芝子实体悬浮液，该灵芝子实体悬浮液为灵芝子实体经由机械式研磨后所得到含有灵芝微粒的液体，并含有纤维质、几丁质及β-葡聚糖，且灵芝微粒的体积平均粒径小于10μm。
本发明的有益效果在于：透过以机械式研磨来制成的灵芝子实体悬浮液，除了无 须萃取便可获得完整的活性成分外，还可大幅提高纤维质比表面积，且纤维质的后续利用 无须再粉碎，可作为一种良好的膳食纤维添加物。 本发明的另一个目的是在提供一种经由机械式研磨制成，且具有纳米/次微米级 灵芝微粒的灵芝子实体悬浮液。 10.如权利要求9所述的纳米/次微米级灵芝子实体悬浮液，其特征在于，粒径小于 1 μ m的灵芝微粒占总灵芝微粒含量的60%以上。 在最高稀释倍率50的情况下（灵芝微粒浓度约100ppm(0. 001mg/mL))，浊度变化 率最小，且以聚山梨醇酐脂肪酸酯类乳化剂的稳定性，于96小时后浊度变化率绝对值均小 于30%。于低稀释倍率（5倍及10倍）下，浊度变化率与乳化剂种类、HLB值似无关联性， 96小时后浊度变化率绝对值均大于80%，也就是无显著稳定效果。 将研磨后及经稳定处理的灵芝子实体悬浮液分别放置在4°C与室温环境下，于储 存期间(0、0.5、1、2、6、12、24、48、72、96小时），取样进行浊度分析和粒径分析。于此试验 中，将添加少许防腐剂，以避免微生物的生长。 13.如权利要求12所述的纳米/次微米级灵芝子实体悬浮液，其特征在于，50%以上的 灵芝微粒的粒径小于lOOnm。
罩丸: 罩丸破裂の一例
浊度是一种量测简易的物理参数，对稳定分散的悬浮溶液而言，其浊度不应随时 间而呈现显著差异。 因此，本发明针对所欲探讨的各种变因，进行浊度分析，以筛选的乳化 剂。 在试验物质给予期间测量动物体重及食物消耗量的变化。 剖检前收集血液样品， 进行血液及血清生化分析。 试验物质给予期间结束，进行剖检，以肉眼观察及记录动物的器 官与组织的变化，并测量主要脏器重量。 在中草药中，灵芝子实体被公认为具有多项保健功能，如抗肿瘤、调节免疫机能、 降血脂、降血压、降血糖、抗病毒、抗过敏、抗氧化、抗辐射、抑制血小板凝集与止痛等，无论 是以完整子实体或萃取物食用，灵芝确实是相当安全的中草药，甚至给予高剂量，例如：每 日30g的干燥子实体萃取物，经证实也无显著的毒性反应，且利用动物实验评估灵芝的营 养价值和毒性，结果显示灵芝并无基因毒性（genotoxicity)。
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将所有动物的组织，肝脏、肾脏、心脏、脾脏、肺脏、罩丸、副罩及子宫卵巢等标的器 官取下后，放入10% formalin固定一星期。 切片后以hematoxylin and eosin染色后，以 显微镜观察。 组织病理切片判读委托台湾动物科技研究所进行。
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将前述前处理所得的灵芝细碎悬浮液于3600rpm的固定转速、360mL/min的固定 进料速率和140mL的固定填充量，及不同固形物浓度与两种研磨珠大小（0. 8mm、0. 3mm钇锆 珠）下研磨30、60、90、120、150、180和270分钟。 发现经前处理后的灵芝细碎悬浮液，其粒 径虽可小于300 μ m，但是绝大部分仍大于150 μ m，因此，欲将灵芝子实体纳米/次微米化需 采用阶段性研磨，也就是先以0. 8mm钇锆珠细磨，待粒径降至约50 μ m以下，再改以0.
睡眠或安靜時突然發生睾丸劇烈疼痛是本病的首發症狀， 也是其主要診斷依據之一。 部分病例伴有噁心嘔吐、陰囊腫脹、觸痛明顯。
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如果是放射性的疼痛， 則有可能是睾丸別的地方帶來的疼痛。 8.如权利要求7所述的灵芝子实体悬浮液，其特征在于，聚山梨醇酐脂肪酸酯是选自 于司盘80、司盘85及司盘80与司盘85的混合所组成的群体。 动物的血液样本取自颈动脉血放入血清分离管，经3000Xg 15分钟离心后 取的血清样本。 分析项目如下：高密度脂蛋白（high density lipoprotein, HDL), 低密度脂蛋白（low density lipoprotein, LDL)、麸氨酸氨基转化酶（glutamic oxaloacetictransaminase, GOT)、麸氨酸丙酮酸氨基转化酶、血液尿素氮、肌氨酸酐、总胆固醇、三酸甘油脂、钠离子(Na+)、钾离 子（K+)、氯离子（Cl—)、葡萄糖等。
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此一种结果也验证了上 述粒径分析仪所测得的结果，并再次确认本发明使用的介质研磨制程，确实可使灵芝子实 体研磨后的灵芝微粒降至纳米/次微米尺度。 以下便以一般热水萃取法获得的灵芝萃取物，与本发明直接将灵芝子实体以机械 式研磨进行纳米/次微米化处理后的灵芝子实体悬浮液进行比较说明。 12.如权利要求10所述的纳米/次微米级灵芝子实体悬浮液，其特征在于，灵芝微粒的 体积平均粒径小于250nm，且灵芝微粒的粒径小于1 μ m。 一般的市售商品，其声称的有效成分多以热水或有机溶剂来提取，虽可取得该有 效成分，但是提取量有限，且尚有加工后的废水、有机溶剂及残渣处理问题。 以机械式研磨 的制程方式，除了可使灵芝子实体悬浮液中具有纤维素、几丁质等膳食纤维，也可借由细磨 过程中灵芝子实体细胞壁的破碎，促使有效成份的释出。 本发明灵芝子实体悬浮液的实施例，是由整株灵芝子实体经过机械式研磨处理制 成，该灵芝子实体悬浮液包含经由机械式研磨灵芝子实体所得到的灵芝微粒，及与灵芝子 实体一起进行研磨的可食性乳化剂。